ﺗﻘﻨﻴﺔ PCR
Polymerase Chain Reaction
ﺗﻔﺎﻋﻞ ﺍﻟﺒﻠﻴﻤﺮﻳﺰ ﺍﻟﺘﺘﺎﺑﻌﻲ
ﺗﺤﻔﻆ ﺍﻟﻤﻌﻠﻮﻣﺎﺕ ﺍﻟﻮﺭﺍﺛﻴﺔ ﻭ ﺍﻧﺘﺎﺝ ﺍﻟﻤﻮﺍﺩ ﻟﺼﻨﻊ ﺍﻟﺨﻼﻳﺎ ﻭ ﺍﻟﺤﻔﺎﻅ ﻋﻠﻴﻬﺎ ﻓﻲ
ﺩﺍﺧﻞ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ( DNA ) . ﻭ ﺗﻘﻮﻡ ﺍﻟﺨﻠﻴﺔ ﺑﻤﻀﺎﻋﻔﺔ ﻛﻤﻴﺔ
ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﻭﻗﺖ ﺍﻧﻘﺴﺎﻡ ﺍﻟﺨﻠﻴﺔ ﺑﺸﻜﻞ ﺗﻠﻘﺎﺋﻲ ﻭ ﺑﺸﻜﻞ ﺳﺮﻳﻊ ﻣﻊ
ﻭﺟﻮﺩ ﻧﻈﺎﻡ ﺗﺼﺤﻴﺢ ﻟﻸﺧﻄﺎﺀ ﺧﻼﻝ ﺍﻟﻨﺴﺦ . . ﻭ ﺗﺒﻠﻎ ﺳﺮﻋﺔ ﺍﻟﻨﺴﺦ
ﻭﺍﻟﻤﻀﺎﻋﻔﺔ ﺇﻟﻰ 1000 ﻗﺎﻋﺪﺓ ﻧﻴﺘﺮﻭﺟﻴﻨﻴﺔ ﺑﺎﻟﺜﺎﻧﻴﺔ ( ﺩﺍﺧﻞ ﺍﻟﻨﻈﺎﻡ
ﺍﻟﺤﻴﻮﻱ ) ﻭ ﻫﻲ ﻛﻤﺎ ﺫﻛﺮﻧﺎ ﺗﺤﺪﺙ ﻓﻲ ﺍﻟﺨﻠﻴﺔ ﻓﻲ ﻭﻗﺖ ﺍﻟﺘﻜﺎﺛﺮ
ﻭﺍﻻﻧﻘﺴﺎﻡ ﻓﻘﻂ .
ﻭﻣﻊ ﺍﻟﺘﻄﻮﺭ
ﻓﻲ ﻣﺠﺎﻝ
ﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎ
ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔ
ﻭﺍﻟﺬﻱ ﻳﻘﻮﻡ
ﻋﻠﻰ ﺍﻟﺘﻌﺎﻣﻞ
ﻣﻊ ﺍﻟﺤﻤﺾ
ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ
( DNA )
ﺑﺸﻜﻞ
ﺃﺳﺎﺳﻲ ،
ﺍﺳﺘﺪﻋﻰ ﺫﻟﻚ ﺍﻟﻌﻠﻤﺎﺀ ﻋﻠﻰ ﺃﻥ ﻳﺒﺤﺜﻮﺍ ﻋﻦ ﻃﺮﻳﻘﺔ ﺃﻭ ﺗﻘﻨﻴﺔ ﺗﻘﻮﻡ ﻋﻠﻰ
ﻣﻀﺎﻋﻔﺔ ﻛﻤﻴﺔ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ (DNA ) ﺑﺸﻜﻞ ﻛﺒﻴﺮ ، ﻓﻜﺎﻥ ﻫﻨﺎﻙ ﻋﺪﺓ
ﻣﺤﺎﻭﻻﺕ ﻟﺘﻨﺸﻴﻂ ﺍﻟﺨﻠﻴﺔ ﻋﻠﻰ ﺍﻻﻧﻘﺴﺎﻡ ﺍﻟﻤﺴﺘﻤﺮ ﺑﺈﺿﺎﻓﺔ ﻋﻮﺍﻣﻞ ﺍﻟﻨﻤﻮ
growth factors ، ﻭﻟﻜﻦ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﻄﺮﻳﻘﺔ ﻟﻢ ﺗﻜﻦ ﺫﺍﺕ ﺟﺪﻩ ﻟﺪﻯ ﺍﻟﻌﻠﻤﺎﺀ
ﻷﺳﺒﺎﺏ ﻛﺜﻴﺮﺓ . ﺇﻟﻰ ﺃﻥ ﺗﻮﺻﻞ ﺍﻟﻌﺎﻟﻢ ﺩ . ﻛﺮﻱ ﻣﻮﻟﺲ Dr. Kerry
Mullis ﻓﻲ ﻋﺎﻡ 1985 ( ﻭ ﻗﺪ ﺣﺼﻞ ﻋﻠﻰ ﺟﺎﺋﺰﺓ ﻧﻮﺑﻞ ﻓﻲ ﺍﻟﻜﻴﻤﻴﺎﺀ
ﻋﺎﻡ 1993 ) ﺑﻨﺸﺮ ﺍﺧﺘﺮﺍﻋﻪ ﻟﺘﻘﻨﻴﺔ ﺍﻟﺒﻲ ﺳﻲ ﺍﺭ PCR ﻓﻜﺎﻧﺖ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﺘﻘﻨﻴﺔ
ﺑﻮﺍﺑﺔ ﻟﻜﺜﻴﺮ ﻣﻦ ﺍﻟﺘﻄﻮﺭﺍﺕ ﺍﻟﻤﺘﺴﺎﺭﻋﺔ ﻓﻲ ﻣﺠﺎﻝ ﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎ ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔ ، ﻣﻦ
ﺃﻫﻢ ﺍﻷﺳﺒﺎﺏ ﺍﻟﺘﻲ ﺳﺎﻋﺪﺕ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﺘﻘﻨﻴﺔ ﻋﻠﻰ ﺍﻻﻧﺘﺸﺎﺭ ﻋﺪﻡ ﺍﻋﺘﻤﺎﺩﻫﺎ ﻋﻠﻰ
ﺍﻟﻨﻈﺎﻡ ﺍﻟﺤﻴﻮﻱ (ﺃﻱ ﺍﻟﺨﻠﻴﺔ ) ﻭ ﺍﻟﺘﺤﻜﻢ ﺑﻜﻤﻴﺔ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ (DNA ) ﻭ
ﻭﺳﺮﻋﺔ ﻓﻲ ﺍﻹﻧﺘﺎﺝ ﻭﻟﻜﻦ ﻛﺎﻥ ﻣﻦ ﻋﻴﻮﺏ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﺘﻘﻨﻴﺔ ﻋﺪﻡ ﻭﺟﻮﺩ ﻧﻈﺎﻡ
ﺇﺻﻼﺡ ﺃﺧﻄﺎﺀ ﺍﻻﺭﺗﺒﺎﻁ ﺍﻟﺨﺎﻃﺊ miss match .
ﻣﺎ ﻫﻮ : PCR
ﻫﻮ ﺗﻘﻨﻴﺔ ﻣﺨﺒﺮﻳﻪ ﺗﻢ ﺍﻛﺘﺸﺎﻓﻬﺎ ﻋﺎﻡ 1983ﻡ ﺗﻘﺮﻳﺒﺎً ﺗﻘﻮﻡ ﻋﻠﻰ ﺇﻛﺜﺎﺭ ﻧﺴﺦ
ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ( DNA ) ﺧﺎﺭﺝ ﺍﻟﻨﻈﺎﻡ ﺍﻟﺤﻴﻮﻱ . ﺃﻱ ﺃﻧﻬﺎ ﻃﺮﻳﻘﺔ
ﻟﻨﺴﺦ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﻓﻲ ﺍﻟﻤﺨﺘﺒﺮ . ﻭ ﻟﺬﻟﻚ ﻓﻬﻲ ﺗﻘﻨﻴﺔ ﺣﻴﻮﻳﺔ ﻻﺳﺘﻨﺴﺎﺥ
ﻗﻄﻌﺔ ﻣﻦ ﻣﺤﺪﺩﺓ ﻣﻦ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﻭ ﻣﻀﺎﻋﻔﺔ ﺇﻧﺘﺎﺟﻬﺎ ﻟﻜﻲ ﻳﺘﺴﻨﻰ
ﺇﺟﺮﻯ ﻋﻠﻴﻪ ﺍﺧﺘﺒﺎﺭﺍﺕ ﻭ ﻓﺤﻮﺻﺎﺕ ﺇﺿﺎﻓﻴﺔ .
ﻣﺎ ﻫﻲ ﻣﺘﻄﻠﺒﺎﺕ : PCR
ﻟﺘﻘﻮﻡ ﺑﺈﻧﺘﺎﺝ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ( DNA ) ﺑﻮﺍﺳﻄﺔ PCR ﻳﺘﺘﻄﻠﺐ ﻋﻠﻴﻚ
ﺗﻮﻓﻴﺮ :
.1 ﺟﻬﺎﺯ ﻟﻠﺘﺤﻜﻢ ﺑﺪﺭﺟﺎﺕ ﺣﺮﺍﺭﺓ ﺍﻟﺘﻔﺎﻋﻞ ﺑﺸﻤﻞ ﺩﻗﻴﻖ ﻭ ﻣﺘﺘﺎﻟﻲ
( ﺍﻟﺪﻭﺭﺓ ﺍﻟﺤﺮﺍﺭﻳﺔ Thermocycle ) : ﻭﻳﻘﻮﻡ ﻫﺬﺍ ﺍﻟﺠﻬﺎﺯ ﺑﺘﻐﻴﺮ
ﺩﺭﺟﺔ ﺍﻟﺤﺮﺍﺭﺓ ﺑﺸﻜﻞ ﺳﺮﻳﻊ ، ﻵﻥ ﺗﻐﻴﺮ ﺩﺭﺟﺔ ﺍﻟﺤﺮﺍﺭﺓ ﻫﻮ ﺍﻷﺳﺎﺱ ﺍﻟﺬﻱ
ﺗﻘﻮﻡ ﻋﻠﻴﻪ ﻓﻜﺮﺓ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﺘﻘﻨﻴﺔ .
.2
ﺍﻟﺒﻠﻴﻤﺮﻳﺰ
:
ﻭﻫﻮ
ﺍﻹﻧﺰﻳﻢ
ﺍﻟﺬﻱ
ﻳﻘﻮﻡ
ﺑﺒﻨﺎﺀ
ﻭﺗﺮﺗﻴﺐ
ﺍﻟﻘﻮﺍﻋﺪ
ﺍﻟﻨﻴﺘﺮﻭﺟﻴﻨﻴﺔ
( ﺣﺪﺍﺕ
ﺍﻟﺤﻤﺾ
ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ (DNA ) ) ، ﻭﻳﺠﺐ ﺃﻥ ﻱﻛﻮﻥ ﻫﺬﺍ ﺍﻹﻧﺰﻳﻢ ﻣﻘﺎﻭﻡ ﻟﻠﺤﺮﺍﺭﺓ
ﺍﻟﻌﺎﻟﻴﺔ ﻟﻴﺘﻤﻜﻦ ﻣﻦ ﺍﻟﻌﻤﻞ . ﻭ ﻗﺪ ﺍﻛﺘﺸﻒ ﺍﻧﺰﻳﻢ ﻣﻘﺎﻭﻡ ﻟﻠﺤﺮﺍﺭﺓ ﻭ ﺍﺳﻢ ﺗﺎﺝ
Tag
.3 ﻣﺠﻤﻮﻋﺔ ﻣﺘﻔﺮﻗﺔ ﻣﻦ ﺍﻟﻘﻮﺍﻋﺪ ﺍﻟﻨﻴﺘﺮﻭﺟﻴﻨﻴﺔ: ( A T C G ) ﻟﻴﺘﻤﻜﻦ
ﺍﻹﻧﺰﻳﻢ ﻣﻦ ﺗﺮﺗﻴﺒﻬﺎ ﻓﻲ ﻣﻮﺍﻗﻌﻬﺎ ﺃﺛﻨﺎﺀ ﻋﻤﻠﻴﺔ ﻧﺴﺦ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ
( DNA ) .
.4 ﺑﺮﻳﻤﺮ Primer : ﻭﻫﻮ ﻗﻄﻌﺔ ﺻﻐﻴﺮﺓ ﻣﻦ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ
( DNA ) ﻟﻴﺘﻤﻜﻦ ﺍﻹﻧﺰﻳﻢ ﻣﻦ ﺑﺪﺍﺀ ﺍﻟﺒﻨﺎﺀ ﻭ ﺍﻟﻨﺴﺦ ﻋﻠﻴﻬﺎ .
.5 ﻭﺍﻟﺸﻲﺀ ﺍﻷﻫﻢ ﻫﻮ ﻭﺟﻮﺩ ﻧﺴﺨﺔ ﻣﻦ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ( DNA )
ﺍﻟﻤﺮﺍﺩ ﻧﺴﺨﻪ .
.6 ﺑﺎﻹﺿﺎﻓﺔ ﺇﻟﻰ ﻣﺤﻠﻮﻝ ﺃﻭ ﻭﺳﻂ ﻟﻴﺘﻢ ﺑﻪ ﺍﻟﺘﻔﺎﻋﻞ : ﻭﻫﺬﺍ ﺍﻟﻤﺤﻠﻮﻝ
ﻳﺨﺘﻠﻒ ﺑﻴﻦ ﺗﻔﺎﻋﻞ ﻭ ﺃﺧﺮ .
ﻋﻤﻠﻴﺔ ﺍﻟﻨﺴﺦ :
ﺑﻌﺪ ﻭﺿﻊ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﻤﺮﺍﺩ ﻧﺴﺨﺔ ﻣﻊ ﺍﻟﺒﺮﻳﻤﺮ ﻭ ﻭ ﺇﻧﺰﻳﻢ
ﺍﻟﺒﻮﻟﻴﻤﺮﻳﺰ ﻭ ﻣﺠﻤﻮﻋﺔ ﻣﻊ ﺍﻷﺣﻤﺎﺽ ﺍﻟﻨﻮﻭﻳﺔ ﻓﻲ ﺃﻧﺒﻮﺏ ﺩﺍﺧﻞ ﺟﻬﺎﺯ
ﺍﻟﺘﺤﻜﻢ ﺍﻟﺤﺮﺍﺭﻱ ﻓﺎﻥ ﻫﻨﺎﻙ 3 ﻣﺮﺍﺣﻞ ﻣﻨﻔﺼﻠﺔ ﺗﻤﺮ ﺑﻬﺎ ﻋﻤﻠﻴﺔ ﺍﻟﻨﺴﺦ:
.1 ﻣﺮﺣﻠﺔ ﺍﻟﺘﻔﻜﻴﻚ Denature : ﺭﻓﻊ ﺍﻟﺤﺮﺍﺭﺓ ﺇﻟﻰ 94 ْﻡ ﻭﺫﻟﻚ ﻟﻔﻚ
ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ( DNA ) ﺍﻷﺻﻞ .
.2 ﻣﺮﺣﻠﺔ ﺍﻻﻟﺘﺼﺎﻕ anneal : ﺇﻧﺰﺍﻝ ﺍﻟﺤﺮﺍﺭﺓ ﺇﻟﻰ ﻣﺎ ﺑﻴﻦ
60-55 ْﻡ ﻟﻴﻘﻮﻡ ﺍﻟﺒﺮﻳﻤﺮ ﺑﺎﻷﻟﺘﺰﺍﻕ ﻓﻴﺰﻳﺎﺋﻴﺎً ﺑﻮﺍﺳﻄﺔ ﺍﻟﺮﻭﺍﺑﻂ
ﺍﻟﻬﻴﺪﺭﻭﺟﻴﻨﻴﺔ ﻣﻊ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ (DNA ) ﺍﻷﺻﻞ .
.3 ﻣﺮﺣﻠﺔ ﺍﻻﻣﺘﺪﺍﺩ extend : ﺛﻢ ﻳﻘﻮﻡ ﺑﺮﻓﻊ ﺩﺭﺟﺔ ﺍﻟﺤﺮﺍﺭﺓ ﺇﻟﻰ
75 ْﻡ ﻟﻴﻘﻮﻡ ﺍﻟﺒﻠﻤﺮﻳﺰ ﺑﻌﻤﻠﻪ ﻓﻲ ﺑﻨﺎﺀ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ (DNA ) ﺍﻟﺠﺪﻳﺪ
.
ﻭﻫﺬﻩ ﺍﻟﻤﺮﺍﺣﻞ ﺍﻟﺜﻼﺙ ﺗﻌﺘﺒﺮ ﺩﻭﺭﺓ ﻛﺎﻣﻠﺔ ﻭﻓﻴﻬﺎ ﻳﺼﺒﺢ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ
( DNA ) ﺍﻷﺻﻞ ﻗﺪ ﺗﻀﺎﻋﻒ ، ﻭﺗﻌﺘﻤﺪ ﻛﻤﻴﺔ ﻧﺎﺗﺞ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ
( DNA ) ﻋﻠﻰ ﻋﺪﺩ ﺍﻟﺪﻭﺭﺍﺕ ( ﻭﺍﻟﺼﻮﺭﺓ ﺍﻟﺘﺎﻟﻴﺔ ﺗﻮﺿﺢ ﺍﻟﻌﻤﻠﻴﺔ ) . .
ﺗﻄﺒﻴﻘﺎﺕ PCR :
ﻟﺘﻖﻧﻴﺔ PCR ﺗﻄﺒﻴﻘﺎﺕ ﻛﺜﻴﺮﺓ ﻓﻲ ﻣﺠﺎﻝ ﺃﺑﺤﺎﺙ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ( DNA )
ﻭ ﺍﻟﻮﺭﺍﺛﺔ ﻭﻣﻨﻬﺎ :
.1 ﺍﻟﻜﺸﻒ ﻋﻦ ﺍﻟﻄﻔﺮﺍﺕ ﺍﻟﻮﺭﺍﺛﻴﺔ : ﻭﺫﻟﻚ ﻋﻦ ﻃﺮﻳﻖ ﻭﺿﻊ ﺑﺮﻳﻤﺮ ﺧﺎﺹ
ﻟﻠﻄﻔﺮﺓ ﻟﺘﻜﺜﻴﺮ ﺍﻟﺠﻴﻦ ﺍﻟﺨﺎﺹ ﺑﻬﺎ . ﻭﻣﻨﻪ ﻧﻘﻮﻡ ﺑﻤﻌﺮﻓﺔ ﺍﻟﻤﺮﺽ ﺇﺫﺍ ﻛﺎﻥ
ﻋﻠﻰ ﺯﻭﺟﻴﻦ ﺍﻟﻜﺮﻭﻣﻮﺳﻮﻣﺎﺕ ﺃﻭ ﻋﻠﻰ ﺍﺣﺪﻫﻤﺎ ( allele ) .
.2 ﺗﻌﻴﻦ ﺍﻟﺒﺼﻤﺔ ﺍﻟﻮﺭﺍﺛﻴﺔ .
.3 ﺍﻟﻜﺸﻒ ﻋﻦ ﺍﻟﻔﻴﺮﻭﺳﺎﺕ : ﻭﻫﺬﻩ ﺍﻟﻄﺮﻳﻖ ﻫﻲ ﺍﻷﺩﻕ ﻓﻲ ﺗﺤﺪﻳﺪ
ﻧﻮﻉ ﻭﺟﻨﺲ ﺍﻟﻔﻴﺮﻭﺱ ﻭﻛﻤﻴﺘﻪ .
4 . ﻫﻮ ﺍﻟﻌﻨﺼﺮ ﺍﻷﻫﻢ ﻓﻲ ﻋﻤﻠﻴﺔ ﺍﻟﺘﺠﻤﻴﻊ ﺍﻟﺠﻴﻨﻲ ( Recombinant
ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ (DNA ) ) : ﺣﻴﺚ ﻧﻘﻮﻡ ﺑﺘﻜﺜﻴﺮ ﺍﻟﺠﻴﻦ ﺍﻟﻤﺮﺍﺩ ﺇﺩﺧﺎﻟﻪ
ﻋﻠﻰ ﺍﻟﺒﻼﺯﻣﺪ ﺃﻭ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ (DNA ) ﺍﻟﻤﻀﻴﻒ .
.5 ﺍﺳﺘﺨﺪﺍﻣﻪ ﻓﻲ ﺗﻐﻴﺮ ﻧﻬﺎﻳﺎﺕ ﺍﻟﺠﻴﻦ ﻟﺘﺼﺒﺢ ﻣﺘﻮﺍﻓﻘﺔ ﻣﻊ ﺇﻧﺰﻳﻤﺎﺕ
ﺍﻟﻘﻄﻊ ( Restriction enzyme ) .
.6 ﻫﻮ ﺍﻟﻌﻤﻠﻴﺔ ﺍﻷﺳﺎﺱ ﻓﻲ ﺗﺤﺪﻳﺪ ﺗﺘﺎﺑﻊ ﺍﻟﻘﻮﺍﻋﺪ ﺍﻟﻨﻴﺘﺮﻭﺟﻴﻨﻴﺔ ﻓﻲ
ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ (DNA ) ( ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ( DNA ) Sequencer
) .
.7 ﻣﻌﺮﻓﺔ ﻃﻮﻝ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ (DNA ) .
.8 ﺗﻘﻨﻴﺔ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ( DNA ) ﺍﻟﻤﻜﻤﻞ ( c ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ
( DNA ) ) .
.9 ﺗﺤﺪﻳﺪ ﺍﻟﺠﻴﻦ ﺍﻟﻤﻄﻠﻮﺏ ﻣﻦ ﺧﻠﻴﻂ ﻣﻦ ﺍﻟﺠﻴﻨﺎﺕ .
.10 ﻳﺴﺘﺨﺪﻡ ﻓﻲ ﺗﻘﻨﻴﺔ ( microarrays ) .
.11 ﻓﻲ ﻣﺸﺮﻭﻉ ﺍﻟﺨﺎﺭﻃﺔ ﺍﻟﺠﻴﻨﻴﺔ ﺍﻟﺒﺸﺮﻳﺔ ( human genome
project ) .
.12 ﺍﻟﺴﺎﻭﺛﺮﻳﻦ ﺑﻠﻮﺕ ( southern plot ) .
.13 ﺗﻘﻨﻴﺔ ﺍﺭﺗﺒﺎﻁ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ( DNA ) – ﺑﺮﻭﺗﻴﻦ ( ﺍﻟﺤﻤﺾ
ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ( DNA ) -Protein Interaction ) .
.14 n ﻣﺠﺎﻝ ﺍﻟﻄﺐ ﺍﻟﺸﺮﻋﻲ ( ﺍﺧﺘﺒﺎﺭ ﺍﻷﻣﻮﻣﺔ ، ﺣﺎﻻﺕ ﺍﻻﻏﺘﺼﺎﺏ ،
ﺗﺤﺪﻳﺪ ﺍﻟﻬﻮﻳﺔ ... ﺍﻟﺦ ) .
ﻭﻏﻴﺮﻫﺎ ﻣﻦ ﺍﻟﺘﻄﺒﻴﻘﺎﺕ ﺍﻟﻤﺨﺒﺮﻳﺔ ﻭﺍﻟﺒﺤﺜﻴﺔ .
ﺃﻧﻮﺍﻉ : PCR ﻫﻨﺎﻙ ﻧﻮﻋﺎﻥ ﻣﻦ PCR :
PCR .1 ﺍﻟﻌﺎﺩﻱ : ﻭﻫﻮ ﻣﺎ ﺗﻢ ﺷﺮﺣﻪ ﻭﺍﻟﺘﻄﺮﻕ ﺍﻟﻴﻪ ﻓﻲ ﺍﻟﺨﻄﻮﺍﺕ
ﺍﻟﺴﺎﺑﻘﺔ .
.2 : rtPCR ﻭﻫﻮ ﺍﺧﺘﺼﺎﺭ ﻟـ ( Real Time PCR ) : ﻭﻫﺬﺍ ﺍﻟﻨﻮﻉ
ﻳﻘﻮﻡ ﻋﻠﻰ ﻧﻔﺲ ﺍﻟﻤﺒﺪﺃ ﻭﻟﻜﻦ ﺍﻟﺨﻼﻑ ﺍﻟﻮﺣﻴﺪ ﻳﻜﻮﻥ ﻣﺮﺑﺘﻂ ﺍﻟﺠﻬﺎﺯ ﺑﻜﻤﺒﻴﻮﺗﺮ
ﻟﺘﺤﺪﻳﺪ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ ﻟﺒﺪﺍ ﺍﻟﺘﻔﺎﻋﻞ ﻭﻣﻦ ﺛﻢ ﺍﻟﻜﻤﻴﺔ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻴﺔ ﻟﻌﺪﺩ ﻧﺴﺦ
ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ (DNA ) ﻭﻳﻌﺘﻤﺪ ﺫﻟﻚ ﻋﻠﻰ ﻭﺟﻮﺩ ﻗﻮﺍﻋﺪ ﻧﻴﺘﺮﻭﺟﻴﻨﻴﺔ
ﺣﺮﺓ ﻣﺸﻌﺔ ﻟﺘﺤﺪﻳﺪ ﺫﻟﻚ . ﻣﻤﺎ ﻳﺴﻬﻞ ﻋﻠﻰ ﺍﻟﺒﺎﺣﺜﻴﻦ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﻟﺘﺤﺪﺩ ﻭﺟﻮﺩ
ﺍﻟﺠﻴﻦ ﺍﻟﻤﻄﻠﻮﺏ ﺃﻭ ﻻ ، ﻭﻛﻤﻴﺔ ﺍﻟﺠﻴﻦ ﺑﺪﻭﻥ ﺍﻟﻮﺻﻮﻝ ﺇﻟﻰ ﻧﻬﺎﻳﺔ ﺍﻟﺪﻭﺭﺍﺕ
ﺍﻟﺤﺮﺍﺭﻳﺔ ﺍﻟﻤﺤﺪﺩﺓ .
Polymerase Chain Reaction
ﺗﻔﺎﻋﻞ ﺍﻟﺒﻠﻴﻤﺮﻳﺰ ﺍﻟﺘﺘﺎﺑﻌﻲ
ﺗﺤﻔﻆ ﺍﻟﻤﻌﻠﻮﻣﺎﺕ ﺍﻟﻮﺭﺍﺛﻴﺔ ﻭ ﺍﻧﺘﺎﺝ ﺍﻟﻤﻮﺍﺩ ﻟﺼﻨﻊ ﺍﻟﺨﻼﻳﺎ ﻭ ﺍﻟﺤﻔﺎﻅ ﻋﻠﻴﻬﺎ ﻓﻲ
ﺩﺍﺧﻞ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ( DNA ) . ﻭ ﺗﻘﻮﻡ ﺍﻟﺨﻠﻴﺔ ﺑﻤﻀﺎﻋﻔﺔ ﻛﻤﻴﺔ
ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﻭﻗﺖ ﺍﻧﻘﺴﺎﻡ ﺍﻟﺨﻠﻴﺔ ﺑﺸﻜﻞ ﺗﻠﻘﺎﺋﻲ ﻭ ﺑﺸﻜﻞ ﺳﺮﻳﻊ ﻣﻊ
ﻭﺟﻮﺩ ﻧﻈﺎﻡ ﺗﺼﺤﻴﺢ ﻟﻸﺧﻄﺎﺀ ﺧﻼﻝ ﺍﻟﻨﺴﺦ . . ﻭ ﺗﺒﻠﻎ ﺳﺮﻋﺔ ﺍﻟﻨﺴﺦ
ﻭﺍﻟﻤﻀﺎﻋﻔﺔ ﺇﻟﻰ 1000 ﻗﺎﻋﺪﺓ ﻧﻴﺘﺮﻭﺟﻴﻨﻴﺔ ﺑﺎﻟﺜﺎﻧﻴﺔ ( ﺩﺍﺧﻞ ﺍﻟﻨﻈﺎﻡ
ﺍﻟﺤﻴﻮﻱ ) ﻭ ﻫﻲ ﻛﻤﺎ ﺫﻛﺮﻧﺎ ﺗﺤﺪﺙ ﻓﻲ ﺍﻟﺨﻠﻴﺔ ﻓﻲ ﻭﻗﺖ ﺍﻟﺘﻜﺎﺛﺮ
ﻭﺍﻻﻧﻘﺴﺎﻡ ﻓﻘﻂ .
ﻭﻣﻊ ﺍﻟﺘﻄﻮﺭ
ﻓﻲ ﻣﺠﺎﻝ
ﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎ
ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔ
ﻭﺍﻟﺬﻱ ﻳﻘﻮﻡ
ﻋﻠﻰ ﺍﻟﺘﻌﺎﻣﻞ
ﻣﻊ ﺍﻟﺤﻤﺾ
ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ
( DNA )
ﺑﺸﻜﻞ
ﺃﺳﺎﺳﻲ ،
ﺍﺳﺘﺪﻋﻰ ﺫﻟﻚ ﺍﻟﻌﻠﻤﺎﺀ ﻋﻠﻰ ﺃﻥ ﻳﺒﺤﺜﻮﺍ ﻋﻦ ﻃﺮﻳﻘﺔ ﺃﻭ ﺗﻘﻨﻴﺔ ﺗﻘﻮﻡ ﻋﻠﻰ
ﻣﻀﺎﻋﻔﺔ ﻛﻤﻴﺔ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ (DNA ) ﺑﺸﻜﻞ ﻛﺒﻴﺮ ، ﻓﻜﺎﻥ ﻫﻨﺎﻙ ﻋﺪﺓ
ﻣﺤﺎﻭﻻﺕ ﻟﺘﻨﺸﻴﻂ ﺍﻟﺨﻠﻴﺔ ﻋﻠﻰ ﺍﻻﻧﻘﺴﺎﻡ ﺍﻟﻤﺴﺘﻤﺮ ﺑﺈﺿﺎﻓﺔ ﻋﻮﺍﻣﻞ ﺍﻟﻨﻤﻮ
growth factors ، ﻭﻟﻜﻦ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﻄﺮﻳﻘﺔ ﻟﻢ ﺗﻜﻦ ﺫﺍﺕ ﺟﺪﻩ ﻟﺪﻯ ﺍﻟﻌﻠﻤﺎﺀ
ﻷﺳﺒﺎﺏ ﻛﺜﻴﺮﺓ . ﺇﻟﻰ ﺃﻥ ﺗﻮﺻﻞ ﺍﻟﻌﺎﻟﻢ ﺩ . ﻛﺮﻱ ﻣﻮﻟﺲ Dr. Kerry
Mullis ﻓﻲ ﻋﺎﻡ 1985 ( ﻭ ﻗﺪ ﺣﺼﻞ ﻋﻠﻰ ﺟﺎﺋﺰﺓ ﻧﻮﺑﻞ ﻓﻲ ﺍﻟﻜﻴﻤﻴﺎﺀ
ﻋﺎﻡ 1993 ) ﺑﻨﺸﺮ ﺍﺧﺘﺮﺍﻋﻪ ﻟﺘﻘﻨﻴﺔ ﺍﻟﺒﻲ ﺳﻲ ﺍﺭ PCR ﻓﻜﺎﻧﺖ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﺘﻘﻨﻴﺔ
ﺑﻮﺍﺑﺔ ﻟﻜﺜﻴﺮ ﻣﻦ ﺍﻟﺘﻄﻮﺭﺍﺕ ﺍﻟﻤﺘﺴﺎﺭﻋﺔ ﻓﻲ ﻣﺠﺎﻝ ﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎ ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔ ، ﻣﻦ
ﺃﻫﻢ ﺍﻷﺳﺒﺎﺏ ﺍﻟﺘﻲ ﺳﺎﻋﺪﺕ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﺘﻘﻨﻴﺔ ﻋﻠﻰ ﺍﻻﻧﺘﺸﺎﺭ ﻋﺪﻡ ﺍﻋﺘﻤﺎﺩﻫﺎ ﻋﻠﻰ
ﺍﻟﻨﻈﺎﻡ ﺍﻟﺤﻴﻮﻱ (ﺃﻱ ﺍﻟﺨﻠﻴﺔ ) ﻭ ﺍﻟﺘﺤﻜﻢ ﺑﻜﻤﻴﺔ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ (DNA ) ﻭ
ﻭﺳﺮﻋﺔ ﻓﻲ ﺍﻹﻧﺘﺎﺝ ﻭﻟﻜﻦ ﻛﺎﻥ ﻣﻦ ﻋﻴﻮﺏ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﺘﻘﻨﻴﺔ ﻋﺪﻡ ﻭﺟﻮﺩ ﻧﻈﺎﻡ
ﺇﺻﻼﺡ ﺃﺧﻄﺎﺀ ﺍﻻﺭﺗﺒﺎﻁ ﺍﻟﺨﺎﻃﺊ miss match .
ﻣﺎ ﻫﻮ : PCR
ﻫﻮ ﺗﻘﻨﻴﺔ ﻣﺨﺒﺮﻳﻪ ﺗﻢ ﺍﻛﺘﺸﺎﻓﻬﺎ ﻋﺎﻡ 1983ﻡ ﺗﻘﺮﻳﺒﺎً ﺗﻘﻮﻡ ﻋﻠﻰ ﺇﻛﺜﺎﺭ ﻧﺴﺦ
ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ( DNA ) ﺧﺎﺭﺝ ﺍﻟﻨﻈﺎﻡ ﺍﻟﺤﻴﻮﻱ . ﺃﻱ ﺃﻧﻬﺎ ﻃﺮﻳﻘﺔ
ﻟﻨﺴﺦ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﻓﻲ ﺍﻟﻤﺨﺘﺒﺮ . ﻭ ﻟﺬﻟﻚ ﻓﻬﻲ ﺗﻘﻨﻴﺔ ﺣﻴﻮﻳﺔ ﻻﺳﺘﻨﺴﺎﺥ
ﻗﻄﻌﺔ ﻣﻦ ﻣﺤﺪﺩﺓ ﻣﻦ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﻭ ﻣﻀﺎﻋﻔﺔ ﺇﻧﺘﺎﺟﻬﺎ ﻟﻜﻲ ﻳﺘﺴﻨﻰ
ﺇﺟﺮﻯ ﻋﻠﻴﻪ ﺍﺧﺘﺒﺎﺭﺍﺕ ﻭ ﻓﺤﻮﺻﺎﺕ ﺇﺿﺎﻓﻴﺔ .
ﻣﺎ ﻫﻲ ﻣﺘﻄﻠﺒﺎﺕ : PCR
ﻟﺘﻘﻮﻡ ﺑﺈﻧﺘﺎﺝ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ( DNA ) ﺑﻮﺍﺳﻄﺔ PCR ﻳﺘﺘﻄﻠﺐ ﻋﻠﻴﻚ
ﺗﻮﻓﻴﺮ :
.1 ﺟﻬﺎﺯ ﻟﻠﺘﺤﻜﻢ ﺑﺪﺭﺟﺎﺕ ﺣﺮﺍﺭﺓ ﺍﻟﺘﻔﺎﻋﻞ ﺑﺸﻤﻞ ﺩﻗﻴﻖ ﻭ ﻣﺘﺘﺎﻟﻲ
( ﺍﻟﺪﻭﺭﺓ ﺍﻟﺤﺮﺍﺭﻳﺔ Thermocycle ) : ﻭﻳﻘﻮﻡ ﻫﺬﺍ ﺍﻟﺠﻬﺎﺯ ﺑﺘﻐﻴﺮ
ﺩﺭﺟﺔ ﺍﻟﺤﺮﺍﺭﺓ ﺑﺸﻜﻞ ﺳﺮﻳﻊ ، ﻵﻥ ﺗﻐﻴﺮ ﺩﺭﺟﺔ ﺍﻟﺤﺮﺍﺭﺓ ﻫﻮ ﺍﻷﺳﺎﺱ ﺍﻟﺬﻱ
ﺗﻘﻮﻡ ﻋﻠﻴﻪ ﻓﻜﺮﺓ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﺘﻘﻨﻴﺔ .
.2
ﺍﻟﺒﻠﻴﻤﺮﻳﺰ
:
ﻭﻫﻮ
ﺍﻹﻧﺰﻳﻢ
ﺍﻟﺬﻱ
ﻳﻘﻮﻡ
ﺑﺒﻨﺎﺀ
ﻭﺗﺮﺗﻴﺐ
ﺍﻟﻘﻮﺍﻋﺪ
ﺍﻟﻨﻴﺘﺮﻭﺟﻴﻨﻴﺔ
( ﺣﺪﺍﺕ
ﺍﻟﺤﻤﺾ
ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ (DNA ) ) ، ﻭﻳﺠﺐ ﺃﻥ ﻱﻛﻮﻥ ﻫﺬﺍ ﺍﻹﻧﺰﻳﻢ ﻣﻘﺎﻭﻡ ﻟﻠﺤﺮﺍﺭﺓ
ﺍﻟﻌﺎﻟﻴﺔ ﻟﻴﺘﻤﻜﻦ ﻣﻦ ﺍﻟﻌﻤﻞ . ﻭ ﻗﺪ ﺍﻛﺘﺸﻒ ﺍﻧﺰﻳﻢ ﻣﻘﺎﻭﻡ ﻟﻠﺤﺮﺍﺭﺓ ﻭ ﺍﺳﻢ ﺗﺎﺝ
Tag
.3 ﻣﺠﻤﻮﻋﺔ ﻣﺘﻔﺮﻗﺔ ﻣﻦ ﺍﻟﻘﻮﺍﻋﺪ ﺍﻟﻨﻴﺘﺮﻭﺟﻴﻨﻴﺔ: ( A T C G ) ﻟﻴﺘﻤﻜﻦ
ﺍﻹﻧﺰﻳﻢ ﻣﻦ ﺗﺮﺗﻴﺒﻬﺎ ﻓﻲ ﻣﻮﺍﻗﻌﻬﺎ ﺃﺛﻨﺎﺀ ﻋﻤﻠﻴﺔ ﻧﺴﺦ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ
( DNA ) .
.4 ﺑﺮﻳﻤﺮ Primer : ﻭﻫﻮ ﻗﻄﻌﺔ ﺻﻐﻴﺮﺓ ﻣﻦ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ
( DNA ) ﻟﻴﺘﻤﻜﻦ ﺍﻹﻧﺰﻳﻢ ﻣﻦ ﺑﺪﺍﺀ ﺍﻟﺒﻨﺎﺀ ﻭ ﺍﻟﻨﺴﺦ ﻋﻠﻴﻬﺎ .
.5 ﻭﺍﻟﺸﻲﺀ ﺍﻷﻫﻢ ﻫﻮ ﻭﺟﻮﺩ ﻧﺴﺨﺔ ﻣﻦ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ( DNA )
ﺍﻟﻤﺮﺍﺩ ﻧﺴﺨﻪ .
.6 ﺑﺎﻹﺿﺎﻓﺔ ﺇﻟﻰ ﻣﺤﻠﻮﻝ ﺃﻭ ﻭﺳﻂ ﻟﻴﺘﻢ ﺑﻪ ﺍﻟﺘﻔﺎﻋﻞ : ﻭﻫﺬﺍ ﺍﻟﻤﺤﻠﻮﻝ
ﻳﺨﺘﻠﻒ ﺑﻴﻦ ﺗﻔﺎﻋﻞ ﻭ ﺃﺧﺮ .
ﻋﻤﻠﻴﺔ ﺍﻟﻨﺴﺦ :
ﺑﻌﺪ ﻭﺿﻊ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﻤﺮﺍﺩ ﻧﺴﺨﺔ ﻣﻊ ﺍﻟﺒﺮﻳﻤﺮ ﻭ ﻭ ﺇﻧﺰﻳﻢ
ﺍﻟﺒﻮﻟﻴﻤﺮﻳﺰ ﻭ ﻣﺠﻤﻮﻋﺔ ﻣﻊ ﺍﻷﺣﻤﺎﺽ ﺍﻟﻨﻮﻭﻳﺔ ﻓﻲ ﺃﻧﺒﻮﺏ ﺩﺍﺧﻞ ﺟﻬﺎﺯ
ﺍﻟﺘﺤﻜﻢ ﺍﻟﺤﺮﺍﺭﻱ ﻓﺎﻥ ﻫﻨﺎﻙ 3 ﻣﺮﺍﺣﻞ ﻣﻨﻔﺼﻠﺔ ﺗﻤﺮ ﺑﻬﺎ ﻋﻤﻠﻴﺔ ﺍﻟﻨﺴﺦ:
.1 ﻣﺮﺣﻠﺔ ﺍﻟﺘﻔﻜﻴﻚ Denature : ﺭﻓﻊ ﺍﻟﺤﺮﺍﺭﺓ ﺇﻟﻰ 94 ْﻡ ﻭﺫﻟﻚ ﻟﻔﻚ
ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ( DNA ) ﺍﻷﺻﻞ .
.2 ﻣﺮﺣﻠﺔ ﺍﻻﻟﺘﺼﺎﻕ anneal : ﺇﻧﺰﺍﻝ ﺍﻟﺤﺮﺍﺭﺓ ﺇﻟﻰ ﻣﺎ ﺑﻴﻦ
60-55 ْﻡ ﻟﻴﻘﻮﻡ ﺍﻟﺒﺮﻳﻤﺮ ﺑﺎﻷﻟﺘﺰﺍﻕ ﻓﻴﺰﻳﺎﺋﻴﺎً ﺑﻮﺍﺳﻄﺔ ﺍﻟﺮﻭﺍﺑﻂ
ﺍﻟﻬﻴﺪﺭﻭﺟﻴﻨﻴﺔ ﻣﻊ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ (DNA ) ﺍﻷﺻﻞ .
.3 ﻣﺮﺣﻠﺔ ﺍﻻﻣﺘﺪﺍﺩ extend : ﺛﻢ ﻳﻘﻮﻡ ﺑﺮﻓﻊ ﺩﺭﺟﺔ ﺍﻟﺤﺮﺍﺭﺓ ﺇﻟﻰ
75 ْﻡ ﻟﻴﻘﻮﻡ ﺍﻟﺒﻠﻤﺮﻳﺰ ﺑﻌﻤﻠﻪ ﻓﻲ ﺑﻨﺎﺀ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ (DNA ) ﺍﻟﺠﺪﻳﺪ
.
ﻭﻫﺬﻩ ﺍﻟﻤﺮﺍﺣﻞ ﺍﻟﺜﻼﺙ ﺗﻌﺘﺒﺮ ﺩﻭﺭﺓ ﻛﺎﻣﻠﺔ ﻭﻓﻴﻬﺎ ﻳﺼﺒﺢ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ
( DNA ) ﺍﻷﺻﻞ ﻗﺪ ﺗﻀﺎﻋﻒ ، ﻭﺗﻌﺘﻤﺪ ﻛﻤﻴﺔ ﻧﺎﺗﺞ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ
( DNA ) ﻋﻠﻰ ﻋﺪﺩ ﺍﻟﺪﻭﺭﺍﺕ ( ﻭﺍﻟﺼﻮﺭﺓ ﺍﻟﺘﺎﻟﻴﺔ ﺗﻮﺿﺢ ﺍﻟﻌﻤﻠﻴﺔ ) . .
ﺗﻄﺒﻴﻘﺎﺕ PCR :
ﻟﺘﻖﻧﻴﺔ PCR ﺗﻄﺒﻴﻘﺎﺕ ﻛﺜﻴﺮﺓ ﻓﻲ ﻣﺠﺎﻝ ﺃﺑﺤﺎﺙ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ( DNA )
ﻭ ﺍﻟﻮﺭﺍﺛﺔ ﻭﻣﻨﻬﺎ :
.1 ﺍﻟﻜﺸﻒ ﻋﻦ ﺍﻟﻄﻔﺮﺍﺕ ﺍﻟﻮﺭﺍﺛﻴﺔ : ﻭﺫﻟﻚ ﻋﻦ ﻃﺮﻳﻖ ﻭﺿﻊ ﺑﺮﻳﻤﺮ ﺧﺎﺹ
ﻟﻠﻄﻔﺮﺓ ﻟﺘﻜﺜﻴﺮ ﺍﻟﺠﻴﻦ ﺍﻟﺨﺎﺹ ﺑﻬﺎ . ﻭﻣﻨﻪ ﻧﻘﻮﻡ ﺑﻤﻌﺮﻓﺔ ﺍﻟﻤﺮﺽ ﺇﺫﺍ ﻛﺎﻥ
ﻋﻠﻰ ﺯﻭﺟﻴﻦ ﺍﻟﻜﺮﻭﻣﻮﺳﻮﻣﺎﺕ ﺃﻭ ﻋﻠﻰ ﺍﺣﺪﻫﻤﺎ ( allele ) .
.2 ﺗﻌﻴﻦ ﺍﻟﺒﺼﻤﺔ ﺍﻟﻮﺭﺍﺛﻴﺔ .
.3 ﺍﻟﻜﺸﻒ ﻋﻦ ﺍﻟﻔﻴﺮﻭﺳﺎﺕ : ﻭﻫﺬﻩ ﺍﻟﻄﺮﻳﻖ ﻫﻲ ﺍﻷﺩﻕ ﻓﻲ ﺗﺤﺪﻳﺪ
ﻧﻮﻉ ﻭﺟﻨﺲ ﺍﻟﻔﻴﺮﻭﺱ ﻭﻛﻤﻴﺘﻪ .
4 . ﻫﻮ ﺍﻟﻌﻨﺼﺮ ﺍﻷﻫﻢ ﻓﻲ ﻋﻤﻠﻴﺔ ﺍﻟﺘﺠﻤﻴﻊ ﺍﻟﺠﻴﻨﻲ ( Recombinant
ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ (DNA ) ) : ﺣﻴﺚ ﻧﻘﻮﻡ ﺑﺘﻜﺜﻴﺮ ﺍﻟﺠﻴﻦ ﺍﻟﻤﺮﺍﺩ ﺇﺩﺧﺎﻟﻪ
ﻋﻠﻰ ﺍﻟﺒﻼﺯﻣﺪ ﺃﻭ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ (DNA ) ﺍﻟﻤﻀﻴﻒ .
.5 ﺍﺳﺘﺨﺪﺍﻣﻪ ﻓﻲ ﺗﻐﻴﺮ ﻧﻬﺎﻳﺎﺕ ﺍﻟﺠﻴﻦ ﻟﺘﺼﺒﺢ ﻣﺘﻮﺍﻓﻘﺔ ﻣﻊ ﺇﻧﺰﻳﻤﺎﺕ
ﺍﻟﻘﻄﻊ ( Restriction enzyme ) .
.6 ﻫﻮ ﺍﻟﻌﻤﻠﻴﺔ ﺍﻷﺳﺎﺱ ﻓﻲ ﺗﺤﺪﻳﺪ ﺗﺘﺎﺑﻊ ﺍﻟﻘﻮﺍﻋﺪ ﺍﻟﻨﻴﺘﺮﻭﺟﻴﻨﻴﺔ ﻓﻲ
ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ (DNA ) ( ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ( DNA ) Sequencer
) .
.7 ﻣﻌﺮﻓﺔ ﻃﻮﻝ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ (DNA ) .
.8 ﺗﻘﻨﻴﺔ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ( DNA ) ﺍﻟﻤﻜﻤﻞ ( c ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ
( DNA ) ) .
.9 ﺗﺤﺪﻳﺪ ﺍﻟﺠﻴﻦ ﺍﻟﻤﻄﻠﻮﺏ ﻣﻦ ﺧﻠﻴﻂ ﻣﻦ ﺍﻟﺠﻴﻨﺎﺕ .
.10 ﻳﺴﺘﺨﺪﻡ ﻓﻲ ﺗﻘﻨﻴﺔ ( microarrays ) .
.11 ﻓﻲ ﻣﺸﺮﻭﻉ ﺍﻟﺨﺎﺭﻃﺔ ﺍﻟﺠﻴﻨﻴﺔ ﺍﻟﺒﺸﺮﻳﺔ ( human genome
project ) .
.12 ﺍﻟﺴﺎﻭﺛﺮﻳﻦ ﺑﻠﻮﺕ ( southern plot ) .
.13 ﺗﻘﻨﻴﺔ ﺍﺭﺗﺒﺎﻁ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ( DNA ) – ﺑﺮﻭﺗﻴﻦ ( ﺍﻟﺤﻤﺾ
ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ( DNA ) -Protein Interaction ) .
.14 n ﻣﺠﺎﻝ ﺍﻟﻄﺐ ﺍﻟﺸﺮﻋﻲ ( ﺍﺧﺘﺒﺎﺭ ﺍﻷﻣﻮﻣﺔ ، ﺣﺎﻻﺕ ﺍﻻﻏﺘﺼﺎﺏ ،
ﺗﺤﺪﻳﺪ ﺍﻟﻬﻮﻳﺔ ... ﺍﻟﺦ ) .
ﻭﻏﻴﺮﻫﺎ ﻣﻦ ﺍﻟﺘﻄﺒﻴﻘﺎﺕ ﺍﻟﻤﺨﺒﺮﻳﺔ ﻭﺍﻟﺒﺤﺜﻴﺔ .
ﺃﻧﻮﺍﻉ : PCR ﻫﻨﺎﻙ ﻧﻮﻋﺎﻥ ﻣﻦ PCR :
PCR .1 ﺍﻟﻌﺎﺩﻱ : ﻭﻫﻮ ﻣﺎ ﺗﻢ ﺷﺮﺣﻪ ﻭﺍﻟﺘﻄﺮﻕ ﺍﻟﻴﻪ ﻓﻲ ﺍﻟﺨﻄﻮﺍﺕ
ﺍﻟﺴﺎﺑﻘﺔ .
.2 : rtPCR ﻭﻫﻮ ﺍﺧﺘﺼﺎﺭ ﻟـ ( Real Time PCR ) : ﻭﻫﺬﺍ ﺍﻟﻨﻮﻉ
ﻳﻘﻮﻡ ﻋﻠﻰ ﻧﻔﺲ ﺍﻟﻤﺒﺪﺃ ﻭﻟﻜﻦ ﺍﻟﺨﻼﻑ ﺍﻟﻮﺣﻴﺪ ﻳﻜﻮﻥ ﻣﺮﺑﺘﻂ ﺍﻟﺠﻬﺎﺯ ﺑﻜﻤﺒﻴﻮﺗﺮ
ﻟﺘﺤﺪﻳﺪ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ ﻟﺒﺪﺍ ﺍﻟﺘﻔﺎﻋﻞ ﻭﻣﻦ ﺛﻢ ﺍﻟﻜﻤﻴﺔ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻴﺔ ﻟﻌﺪﺩ ﻧﺴﺦ
ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ (DNA ) ﻭﻳﻌﺘﻤﺪ ﺫﻟﻚ ﻋﻠﻰ ﻭﺟﻮﺩ ﻗﻮﺍﻋﺪ ﻧﻴﺘﺮﻭﺟﻴﻨﻴﺔ
ﺣﺮﺓ ﻣﺸﻌﺔ ﻟﺘﺤﺪﻳﺪ ﺫﻟﻚ . ﻣﻤﺎ ﻳﺴﻬﻞ ﻋﻠﻰ ﺍﻟﺒﺎﺣﺜﻴﻦ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﻟﺘﺤﺪﺩ ﻭﺟﻮﺩ
ﺍﻟﺠﻴﻦ ﺍﻟﻤﻄﻠﻮﺏ ﺃﻭ ﻻ ، ﻭﻛﻤﻴﺔ ﺍﻟﺠﻴﻦ ﺑﺪﻭﻥ ﺍﻟﻮﺻﻮﻝ ﺇﻟﻰ ﻧﻬﺎﻳﺔ ﺍﻟﺪﻭﺭﺍﺕ
ﺍﻟﺤﺮﺍﺭﻳﺔ ﺍﻟﻤﺤﺪﺩﺓ .
تعليقات
إرسال تعليق
مرحبااااااااااا